أخبار

الجافا سكريبت غير مفعل حاليا في متصفحك.لن تعمل بعض ميزات هذا الموقع إذا تم تعطيل JavaScript.
سجل مع التفاصيل الخاصة بك والعقار المحدد الذي يهمك ، وسنطابق المعلومات التي تقدمها مع المقالات الموجودة في قاعدة البيانات الشاملة الخاصة بنا وسنرسل لك نسخة PDF على الفور عبر البريد الإلكتروني.
Ding Jingnuo ، Zhao Weifeng ، قسم الأمراض المعدية ، المستشفى الأول التابع لجامعة Suzhou ، مدينة Suzhou ، مقاطعة Jiangsu ، 215000 Tel.أورام الجهاز الهضمي مع بقاء إجمالي للبقاء لمدة 5 سنوات بنسبة 14.1٪.يتم تشخيص العديد من مرضى سرطان الكبد في مرحلة متقدمة ، لذا فإن الفحص المبكر ضروري لتقليل الوفيات الناجمة عن سرطان الكبد.بالإضافة إلى مؤشرات الكشف الشائعة الاستخدام مثل بروتين ألفا فيتوبروتين المصل (AFP) ، وبروتين ألفا فيتوبروتين متفاعل للعدسة (AFP-L3) ، والبروثرومبين غير الطبيعي (بروتين II الناجم عن نقص فيتامين K ، PIVKA-II) ، تقنيات خزعة السوائل لقد ثبت أن له قيمة تشخيصية في اكتشاف سرطان الكبد.مقارنة بالإجراءات الغازية ، يمكن لخزعة السوائل الكشف عن المستقلبات الخبيثة المنتشرة.تكتشف تقنيات خزعة السوائل الخلايا السرطانية المنتشرة ، والحمض النووي للورم المنتشر ، والحمض النووي الريبي المنتشر ، والإكسوسومات وتستخدم للفحص المبكر والتشخيص والتقييم النذير لمرض سرطان الكبد.تستعرض هذه المقالة البيولوجيا الجزيئية وتطبيق تقنيات خزعة السوائل المختلفة لعزل المؤشرات الحيوية الواعدة التي قد تكون خيارات قابلة للتطبيق للتقييم المبكر لـ HCC لتحسين الفحص المبكر لمجموعات سرطان الكبد عالية الخطورة.الكلمات المفتاحية: تقنية خزعة السوائل ، سرطان الخلايا الكبدية ، المجموعة عالية الخطورة.
سرطان الخلايا الكبدية (HCC) هو ورم خبيث شائع في الجهاز الهضمي ، ويحتل المرتبة السادسة بين حالات الأورام الخبيثة الجديدة لدى كل من الرجال والنساء.1 في جميع أنحاء العالم ، يعد سرطان الكبد السبب الرئيسي الثالث للوفاة من السرطان بعد سرطان الرئة والقولون والمستقيم ، حيث يمثل 8.3٪ من الوفيات المرتبطة بالسرطان من جميع الأورام الخبيثة.1 يرتبط تشخيص سرطان الكبد ارتباطًا وثيقًا بمرحلة التشخيص.الأسباب الرئيسية لضعف البقاء على قيد الحياة في سرطان الكبد هي النقائل داخل الكبد ، وجلطة الورم الوريدي البابي ، والنقائل البعيدة التي تحول دون الاستئصال ، والعديد من هذه الخصائص موجودة بالفعل في المرضى في وقت التشخيص.
بناءً على إرشادات التشخيص والعلاج ، فإن عوامل الخطر الرئيسية للإصابة بسرطان الكبد هي تليف الكبد ، وعدوى فيروس التهاب الكبد B المزمن (HBV) أو فيروس التهاب الكبد C (HCV) ، ومرض الكبد الدهني الكحولي ، ومرض الكبد الدهني غير الكحولي (NAFLD). ).2 بالإضافة إلى ذلك ، تشمل عوامل الخطر الخاصة بسرطان الكبد (HCC) تناول الطعام الملوث بالأفلاتوكسين ، وداء البلهارسيات ، والأسباب الأخرى لتليف الكبد ، والتاريخ العائلي لسرطان الكبد ، والسكري ، والسمنة ، والتدخين ، وإصابات الكبد الناجمة عن الأدوية.يجب أن تخضع المجموعات المعرضة للخطر في سن 35 و 45 عامًا لفحوصات طبية منتظمة.يعد الفحص المبكر استراتيجية علاجية مبكرة مهمة لتحسين البقاء على قيد الحياة بشكل عام لمرضى سرطان الكبد.
يوصى باستخدام المؤشرات الحيوية مثل AFP و AFP-L3 و PIVKA-II للفحص المبكر لـ HCC3،4.أظهرت تقنيات الخزعة السائلة نتائج واعدة في التشخيص المبكر وتقييم العلاج.تم إحراز تقدم كبير في خزعة HCC السائلة ، والتي قد يكون لها حساسية وخصوصية أعلى من واسمات المصل الشائعة الاستخدام مثل AFP (الجدول 1).
AFP هو واصم حيوي يستخدم على نطاق واسع في سرطان الكبد وهو حاليًا أكثر العلامات الحيوية تفصيلاً المستخدمة على نطاق واسع للفحص المبكر والتشخيص وتقييم المرض.يعتبر مستوى AFP المرتفع باستمرار أحد عوامل الخطر لتطور سرطان الكبد.7،8 يتزايد معدل اكتشاف سرطان الخلايا الكبدية الصغيرة (sHCC) مع تطور التصوير بالموجات فوق الصوتية والتصوير المقطعي المحوسب ، وقد وجد أن وكالة فرانس برس غير حساسة بشكل خاص للكشف عن سرطان الخلايا الكبدية في الممارسة السريرية.وفقًا لدراسة استعادية متعددة المراكز 9 ، تم العثور على AFP إيجابية في 46 ٪ (616/1338) من حالات سرطان الكبد و 23.4 ٪ (150/641) من حالات الإصابة بسرطان الكبد.بالإضافة إلى ذلك ، ترتفع مستويات الـ AFP في المرضى الذين يعانون من أمراض الكبد المزمنة وتليف الكبد.10 وبالتالي ، فإن وكالة فرانس برس لها تأثير فحص محدود لـ sHCC.11 وفقًا لإرشادات الممارسة السريرية لمنطقة آسيا والمحيط الهادئ لسرطان الخلايا الكبدية ، لا يُنصح باستخدام AFP. قيمة تشخيصية أعلى في سرطان الكبد.13 بالمقارنة مع خزعة الأنسجة ، تكتشف خزعة السوائل بشكل أساسي المستقلبات المرتبطة بالورم في سوائل الجسم (الدم ، اللعاب ، السائل الجنبي ، السائل النخاعي ، أو البول) وهي أقل توغلاً للأنسجة.14 بالإضافة إلى ذلك ، قد تعكس الخزعات السائلة سمات خبيثة غير موجودة في أنسجة الورم الأولية.15 لم يتم اختبار الخزعات السائلة بعد في الممارسة السريرية لجميع أنواع الأورام ، ولكن إمكاناتها التشخيصية في السرطان تجذب انتباه أطباء الأورام.يمكن أن تكشف خزعة السوائل عن الخلايا السرطانية المنتشرة (CTCs) ، والحمض النووي للورم المنتشر (cDNA) ، والحمض النووي الريبي الحر (ecRNA) ، والإكسوسومات.في هذه المقالة ، سنناقش خصائص ودور وتطبيق تقنيات خزعة السوائل المختلفة في الفحص المبكر لمجموعات سرطان الكبد عالية الخطورة.
تم وصف الحمض النووي خارج الخلية (cfDNA) في عينات الدم المأخوذة من أفراد أصحاء لأول مرة في عام 1948 بواسطة Mandel et al.17 cfDNA عبارة عن جزء من DNA خالٍ من الخلايا يبلغ طوله حوالي 160-180 زوجًا قاعديًا ، وينشأ أساسًا من الخلايا الليمفاوية والخلايا النخاعية.ctDNA هو جزء محدد من الحمض النووي متحور تطلقه الخلايا السرطانية في الدم المحيطي ، والذي يمثل المعلومات الجينية للخلايا السرطانية بعد بعض العمليات الفيزيولوجية المرضية ، بما في ذلك النخر والاستماتة والإفراز.تختلف نسبة ctDNA في إجمالي cfDNA اختلافًا كبيرًا مع نوع الورم ، ويقال إن شظايا (كدنا) عادة ما تكون أقل من 167 نقطة أساس في الطول.أظهرت دراسة أندرهيل أن شظايا cfDNA أقصر عمومًا من cfDNA الطبيعي. وبالمقارنة مع الأفراد الأصحاء ، فإن الطول الإجمالي لشظايا cfDNA في دم مرضى السرطان أقصر ، لذلك يمكن استخدام cfDNA كمؤشر للفحص المبكر للورم.يمكن أن يؤدي تخصيب مجموعات فرعية معينة من أطوال أجزاء cfDNA إلى تحسين اكتشاف cDNA المرتبط بالأورام الصلبة غير النقيلية.أظهرت الدراسات أن ctDNA موجود في أكثر من 75٪ من سرطانات البنكرياس والقولون والمثانة والجهاز الهضمي والكبد والمبيض والثدي وسرطان الجلد وسرطان الرأس والعنق المتقدم.20،21 ومع ذلك ، فإن كمية ctDNA في الدم تعتمد على مكان الورم.22 في دراسة أجرتها Bettegoud ، وجد أن المرضى الذين يعانون من سرطان القولون والمستقيم والثدي والكبد والرئة والبروستات لديهم مستويات أعلى من cDNA في دمائهم من السرطانات الأخرى.في المقابل ، في المرضى الذين يعانون من سرطان الفم ، وسرطان البنكرياس ، وسرطان المعدة ، والورم الدبقي ، كان تركيز cDNA في الدم أقل.واحد وعشرين
نظرًا لأن ctDNA يحتوي على نفس الطفرات الجينية مثل الخلايا السرطانية الأولية ، يمكن استخدام cDNA للكشف عن الطفرات غير المتجانسة الخاصة بالورم والتغيرات اللاجينية ، بما في ذلك الميثيل ، الهيدروكسي ميثيل ، اختلافات النوكليوتيدات المفردة ، وتغيرات رقم النسخ.ثلاثة وعشرين
مثيلة الحمض النووي هي واحدة من أكثر التغيرات اللاجينية شيوعًا التي تؤدي إلى كبت الجينات.بالمقارنة مع الخلايا الطبيعية ، هناك اختلافات في المستوى العام لميثيل جينوم الخلية الورمية ، خاصة في مثيلة الجينات الكابتة للورم ، والتي يمكن اكتشافها في مرحلة مبكرة ، مما يشير إلى أن التغيرات في مثيلة الحمض النووي قد تكون مؤشرًا مبكرًا الكشف عن الأورام.يمكن تعطيل الجينات الكابتة للورم المرتبطة بسرطان الخلايا الكبدية عن طريق مثيلة المحفز ، وبالتالي تحفيز تكون الأورام.24 مثيلة الحمض النووي هي علامة مثالية للتشخيص المبكر للأورام بسبب خصوصية الأنسجة ، وإمكانية الكشف ، والاستقلال عن العمر.بالإضافة إلى ذلك ، فإن مثيلة الحمض النووي أكثر شيوعًا مقارنة بالطفرات الجسدية نظرًا لوجود المزيد من المناطق المستهدفة والعديد من مواقع CpG المتغيرة في كل منطقة من الجينوم المستهدف.25 بالإضافة إلى العديد من مواقع CpG ، تم تحديد عدد كبير من مواقع فرط الميثيل المستقلة في ctDNA في DBX2 و THY1 و MT1M و INK4A و VIM و FBLN1 و RGS10.26 Xu et al.تم العثور على مقارنة بين عينات cfDNA من 1098 مريضًا من مرضى سرطان الكبد و 835 عنصر تحكم صحي كانت الجينات المرتبطة بسرطان الكبد (HCC) مرتبطة ارتباطًا وثيقًا بتوقيعات مثيلة البلازما (كدنا) المقابلة.25 بناءً على التحليل المختبري ، تم تطوير نموذج تنبؤي يحتوي على 10 علامات مثيلة بحساسية ونوعية 85.7٪ و 94.3٪ على التوالي ، وكانت هذه العلامات مرتبطة بشكل كبير بكتلة الورم ومرحلة الورم والاستجابة للعلاج.تشير هذه النتائج إلى أن استخدام علامات مثيلة (كدنا) يحمل وعدًا كبيرًا في التشخيص والمراقبة والتنبؤ بسرطان الكبد.في نموذج مثيلة يتكون من ثلاثة جينات ميثلة شاذة (APC ، COX2 ، RASSF1A) وميرنا واحد (miR203) قدمه Lu et al ، كانت حساسية وخصوصية النموذج 27 لتشخيص سرطان الكبد المرتبط بفيروس التهاب الكبد B قابلة للمقارنة.80٪.بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للنموذج الكشف عن 75٪ من مرضى سرطان الكبد (HCC) غير المشخصين بمستوى AFP يبلغ 20 نانوغرام / مل.إن الجين الخاص بعائلة المجال المرتبط بـ Ras 1A (RASSF1A) هو تسلسل الحمض النووي المتكرر الرئيسي في الجينوم البشري.أراوجو وآخرون.خلص إلى أن فرط الميثيل لمحفز RASSF1A يمكن أن يكون علامة حيوية قيّمة للفحص المبكر لـ HCC وهدف جزيئي محتمل للعلاج اللاجيني.28 في إحدى الدراسات ، تم العثور على فرط ميثيل مصل RASSF1A في 73.3 ٪ من المرضى الذين يعانون من سرطان الكبد.29 إن عنصر النيوكليوتيدات 1 طويل التشتت (LINE-1) هو وسيط آخر نشط للغاية في التحويل الرجعي.تم العثور على Hypomethylation لـ LINE-1 في الحمض النووي لـ 66.7 ٪ من عينات مصل سرطان الكبد ، وكان مرتبطًا بالتكرار المبكر وضعف البقاء على قيد الحياة بعد الاستئصال الجذري.29 Hypermethylation هي عملية وراثية شائعة تلعب دورًا فريدًا في تطور تليف الكبد وسرطان الكبد.30 في المقابل ، فإن عملية إزالة الميثيل بالهيدروكسيميثيل هي عملية إزالة الميثيل التي تحفز إعادة تنشيط الجينات والتعبير عنها ، ويمكن استخدام اكتشاف منتج 5-هيدروكسي ميثيل سيتوزين (5-hmC) في هذه العملية لتحديد الورم.ترتبط الميثيل وميثيل الهيدروكسيميثيل في [كدنا] بتكوين الأورام ويمكن أن تساهم في الفحص المبكر لـ سرطان الكبد.في دراسة أجريت على 2554 شخصًا ، تم العثور على 31 5-hmCs على مستوى الجينوم في عينات cfDNA ، وتم تحديد 32 جينًا من خلال مقارنة متواليات 5-hmC في مرضى سرطان الكبد والمجموعات المعرضة للخطر مثل المصابين بأمراض مزمنة.النماذج التشخيصية لأمراض الكبد.وتليف الكبد.كان هذا النموذج متفوقًا على AFP في التمييز بين سرطان الكبد والأنسجة غير الورمية.
يمكن أن تؤدي الطفرات في مناطق الترميز إلى تشوهات النسخ ، والتي يمكن أن تؤدي إلى تغييرات في تسلسل البروتين وفي النهاية السرطان.تعد متغيرات النيوكليوتيدات المفردة علامات جينومية مهمة للكشف المبكر عن الورم نظرًا لموثوقيتها العالية في الأنسجة وخصوصية الأنسجة والأورام العالية.حددت العديد من الدراسات المتعلقة بسرطان الكبد باستخدام تسلسل الجيل التالي (NGS) للإكسوم وتسلسل الجينوم الكامل للسرطان الجينات الخلوية المتحولة الشائعة مثل TP53 و CTNNB1 ، بالإضافة إلى العديد منها ARID1A و MLL و IRF2.تظهر الجينات الجديدة ، ATM ، CDKN2A ، FGF19 ، PIK3CA ، RPS6KA3 و JAK1 معدلات طفرة معتدلة. يشير تحليل وظيفة الجينات المتحولة إلى أن التعديلات في إعادة تشكيل الكروماتين ، ونقل إشارة Wnt / β-catenin و JAK / STAT ، ومسار دورة الخلية P53 ، والمعدلات اللاجينية ، ومسارات الإجهاد التأكسدي ، ومسار PI3K / AKT / MTOR و RAS / RAF / يلعب مسار كيناز MAPK أدوارًا حاسمة في تكوين الأورام HCC. 32،33 في دراسة تم فيها اكتشاف الطفرات المرتبطة بالورم ، وجد Huang et al أن تواتر الطفرات المرتبطة بالورم التي تعتمد على ctDNA كان 19.5٪ ، وكانت الخصوصية 90٪ .34 بالإضافة إلى ذلك ، كان المرضى الذين عانوا من غزو الأوعية الدموية أكثر عرضة لطفرات ctDNA (P = 0.041) وبقاء أقصر بدون تكرار (P <0.001). يشير تحليل وظيفة الجينات المتحولة إلى أن التعديلات في إعادة تشكيل الكروماتين ، ونقل إشارة Wnt / β-catenin و JAK / STAT ، ومسار دورة الخلية P53 ، والمعدلات اللاجينية ، ومسارات الإجهاد التأكسدي ، ومسار PI3K / AKT / MTOR و RAS / RAF / يلعب مسار كيناز MAPK أدوارًا حاسمة في تكوين الأورام HCC. 32،33 في دراسة تم فيها اكتشاف الطفرات المرتبطة بالورم ، وجد Huang et al أن تواتر الطفرات المرتبطة بالورم التي تعتمد على ctDNA كان 19.5٪ ، وكانت الخصوصية 90٪ .34 بالإضافة إلى ذلك ، كان المرضى الذين عانوا من غزو الأوعية الدموية أكثر عرضة لطفرات ctDNA (P = 0.041) وبقاء أقصر بدون تكرار (P <0.001).يشير تحليل وظيفة الجينات المتحولة إلى أن التغييرات في إعادة تشكيل الكروماتين ، وإشارات Wnt / β-catenin و JAK / STAT ، ومسار دورة الخلية P53 ، والمعدلات اللاجينية ، ومسارات الإجهاد التأكسدي ، ومسار PI3K / AKT / MTOR ، ومسارات كيناز RAS / RAF / MAPK دور حاسم في تكوين الأورام HCC. 32،33 في دراسة وجدت طفرات مرتبطة بالورم ، Huang et al.وجد أن تواتر الطفرات المرتبطة بالورم المرتبط بالـ ctDNA كان 19.5٪ والنوعية 90٪..34 роме того، у пациентов сосудистой инвазией. .34 بالإضافة إلى ذلك ، كان لدى المرضى الذين يعانون من غزو الأوعية الدموية المزيد من طفرات (كدنا) (P = 0.041) وبقاء أقصر خالٍ من الأمراض (P <0.001).كشف التحليل الوظيفي للجينات الطافرة عن إعادة تشكيل الكروماتين ، وإشارات Wnt / β-catenin و JAK / STAT ، ومسار دورة الخلية P53 ، والمعدلات اللاجينية ، ومسار الإجهاد التأكسدي ، ومسار PI3K / AKT / MTOR ، و RAS / RAF / MAPK يلعب مسار كيناز دورًا مهمًا في تكوين الأورام في سرطان الكبد. 32،33 在 一项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中 ， Huang 等 人 发现 肿瘤 相关 突变 依赖 ctDNA 的 频率 为 19.5٪ ， 特异性 为 90٪ .34 此外 ， 经历 血管 侵犯 的 患者 更有 可能 发生 ctDNA突变 （P = 0.041） 和 更 短 的 无 复发 生存 期 （P <0.001）。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖 于 ctdna 的 为 为 19.5٪ ， 特异性 为 90٪ .34 此外 经历 血管 的 更 ctdna 突变 （P = 0.041） 和 更短 的 无 复发 生存 期 （ف <0.001）。32،33 في دراسة وجدت طفرات مرتبطة بالورم ، Huang et al.وجد أن الطفرات المرتبطة بالورم تعتمد على (كدنا) بنسبة 19.5٪ مع خصوصية 90٪ 34. بالإضافة إلى ذلك ، كان المرضى الذين خضعوا لغزو الأوعية الدموية أكثر عرضة لتطوير (كدنا).мутация (P = 0،041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0،001). طفرة (P = 0.041) وبقاء أقصر خالية من الأمراض (P <0.001).جين TP53 الشائع الآخر هو العامل الرئيسي لسرطان الخلايا الكبدية ، والذي يحتوي على معدل طفرة يزيد عن 30٪.أظهرت الدراسات أن تواتر طفرات TP53 في ctDNA في الدم والبول تتراوح من 5٪ إلى 60٪.أظهرت دراسة يوهان أن طيف طفرة ctDNA في سرطان الخلايا الكبدية المتأخر له معدل تحور مماثل لمعدل تحور سرطان الكبد المبكر ، بما في ذلك محفز TERT (51٪) ، TP53 (32٪) ، CTNNB1 (17٪) ، PTEN (8٪) ، طفرات في AXIN1.و ARID2 و KMT2D و TSC2 (6٪ لكل منهما).36 يلعب الجين الورمي β-catenin (CTNNB1) دورًا مهمًا في مسار إشارات Wnt.يمكن أن يعزز منشط النسخ CTNNB1 التعبير الجيني ، مما قد يؤدي إلى تكاثر الخلايا ، وتثبيط موت الخلايا المبرمج ، وتكوين الأوعية.يمكن أن يتفاعل CTNNB1 أيضًا مع TERT للحث على تحول خلايا الكبد.33 غالبًا ما يتم تحور محفز TERT في بعض الأورام الصلبة.قد تؤدي التعديلات في TERT ، وهي واحدة من أولى التغيرات الجينية في التحول الخبيث لـ HCC ، إلى إعادة تنشيط التيلوميراز في خلايا الكبد التليفية وقد تعزز الانتشار وتمنع الشيخوخة.تم الإبلاغ عن حدوث طفرات في محفز TERT 33-37 في 59-90 ٪ من المرضى الذين يعانون من عقيدات الكبد التكاثرية وسرطان الكبد المبكر وترتبط بالبقاء على قيد الحياة.38
تعد تغييرات رقم النسخ (CNA) نوعًا فرعيًا مهمًا من الطفرات الجسدية.أظهرت الأبحاث أن العبء الواسع النطاق والبؤري لـ CNA هو بصمة جينية قادرة على التنبؤ بالتسلل المناعي للورم والاستبعاد في بعض أنواع السرطان.39 إشارات تسلل نشطة ، نشاط تحلل خلوي مرتفع ، التهاب حاد وعلامات وراثية مرتبطة بعرض مستضد في سرطان الكبد.كشف تحليل مصفوفة البيانات لتعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة في 477 شخصًا عن عبء منخفض على الجهاز العصبي المركزي.في المقابل ، أظهرت الأورام غير المستقرة الكروموسومية ذات الحمل العالي من CNA علامات رفض المناعة وارتبطت بالانتشار وإصلاح الحمض النووي وخلل TP53.شو وآخرون.أظهر أن مجموعة HCC لديها درجات أعلى من CNA من مجموعة أمراض الكبد المزمنة.40 باستخدام تسلسل الجينوم الكامل لخلية واحدة ، تم العثور على CNAs تظهر في وقت مبكر في سرطانة الكبد وتبقى مستقرة نسبيًا أثناء تقدم الورم.41 تشونغ وآخرون.وجدت أن مستويات cfDNA كانت مرتفعة بشكل ملحوظ في مرضى سرطان الكبد وأن CNAs على مستوى الجينوم في cfDNA كانت علامة تنبؤية مستقلة مهمة في مرضى سرطان الكبد الذين عولجوا باستخدام سورافينيب.كان المرضى الذين يعانون من عبء CNA أعلى من المرجح أن يكون لديهم تطور المرض والوفاة من أولئك الذين لديهم عبء أقل من CNA.أوليريش وآخرون.وجدت أنه يمكن استخدام مؤشر عدم استقرار رقم النسخ (CNI) لتقييم CNA في cfDNA لمرضى السرطان.وأشاروا إلى أن المرضى الذين يعانون من سرطان متقدم لديهم درجات أعلى بكثير من CNI مقارنة بمجموعة التحكم ، والتي تقيم استجابة المريض للعلاج الكيميائي والعلاج المناعي.43 تشير هذه النتائج إلى أن CNAs الموجودة في عينات الخزعة السائلة قد تكون بمثابة مؤشرات تنبؤية في المرضى المصابين بالسرطان المتقدم.سرطان الكبد على خلفية العلاج الجهازي.
حاليًا ، يمكن تقسيم الطرق المستخدمة للكشف عن ctDNA إلى طرق مستهدفة وغير مستهدفة.باختصار ، الطرق المستهدفة مثل تفاعل البوليميراز الرقمي (dPCR) ، PCR الرقمي BEAMing ، نظام الطفرة الحرارية التضخمية- PCR ، Capp-Seq و Tam-Seq حساسة للغاية للجينات المحددة مسبقًا.توفر الطرق غير المستهدفة مثل تسلسل الجينوم الكامل و NGS رؤية شاملة للمشهد الجينومي بأكمله.44 مقارنةً باللوحات المستهدفة ، لا يمكن لتسلسل الجينوم الكامل أن يكتشف فقط طفرات النقاط وعمليات الإدخال ، ولكن أيضًا إعادة الترتيب واختلافات رقم النسخ.التشخيص ، و CTC و cfDNA هي مؤشرات جيدة يمكن استخدامها للرصد الديناميكي لـ HCC.بالإضافة إلى ذلك ، قد يكون تحليل cfDNA أكثر فائدة في الكشف عن سرطان الكبد.يان وآخرون.أظهر أن cfDNA في بلازما المرضى الذين يعانون من سرطان الكبد كان أعلى بكثير من المرضى الذين يعانون من تليف الكبد والضوابط الصحية.مقارنةً بـ AFP ، من المتوقع أن يكون ctDNA علامة فحص أفضل لـ HCC في وقت مبكر.46 في دراسة مستقبلية لـ 47 خزعة سائلة اختبرت cfDNA والبروتين في مجموعة سكانية ، ثبت أنها فعالة في التمييز بين المرضى المصابين بسرطان الكبد والمرضى الذين لا يعانون من سرطان الكبد.في متابعة لـ 331 مريضًا بالموجات فوق الصوتية عاديين وسلبيين من الـ AFP ، كانت حساسية ونوعية cfDNA لتشخيص سرطان الكبد 100٪ و 94٪ على التوالي ، لذلك يمكن لـ cDNA اكتشاف سرطان الكبد في الأفراد المصابين بفيروس HBsAg بدون أعراض.في دراسة Yeo48 ، تم العثور على تردد عالٍ (92.5٪) من فرط الميثيل لمحفز RASSF1A في مرضى سرطان الكبد.بالإضافة إلى ذلك ، Xu et al.أنشأ نموذجًا تشخيصيًا للتنبؤ بسرطان الكبد باستخدام لوحة من علامات مثيلة محددة بدقة وحساسية 90.5٪ و 83.3٪ على التوالي.تسمح اللوحة للمرضى الذين يعانون من سرطان الكبد بالتمييز عن المرضى الذين يعانون من أمراض الكبد الأخرى ، وهو أفضل من الـ AFP.ووجدوا أيضًا أن الضوابط العادية التي أثبتت نتائجها إيجابية قد يكون لها عوامل خطر للإصابة بسرطان الكبد ، مثل عدوى التهاب الكبد B أو تاريخ من تعاطي الكحول.نفترض أن العوامل عالية الخطورة لـ HCC قد تعزز فرط الميثيل لـ cfDNA ، والذي يساهم بعد ذلك في تطور HCC ، وبالتالي قد يلعب cfDNA دورًا رئيسيًا في فحص المجموعات المعرضة للخطر.كاي وآخرونتلخيص النطاق الكامل لطفرات ctDNA وتقديم استراتيجية قوية لتقييم عبء الورم لدى المرضى.49 يمكن لهذه الاستراتيجية تحديد تكوين الأورام بمتوسط ​​4.6 شهرًا قبل تغيير التصوير وأظهرت أداءً تشخيصيًا فائقًا مقارنةً بالعلامات الحيوية في المصل AFP و AFP-L3 و PIVKA-II.تم إثبات القيمة التشخيصية لاختبار (كدنا) عندما لا يكون تقييم الصورة متاحًا ، لذلك فإن اختبار (كدنا) له قيمة في تشخيص سرطان الكبد في وقت مبكر في المجموعات المعرضة للخطر.في الآونة الأخيرة ، استخدم العلماء تقنية NGS لتحليل مؤشرات التباين الجيني متعدد المتغيرات (بما في ذلك 5-hydroxymethylcytosine ، 5′-motif ، التجزئة ، تتبع النواة ، HIFI) في 3204 عينة سريرية و cfDNA.أظهرت 50 نماذج HIFI معاد التحقق من صحتها مع ثلاث مجموعات تدريب واختبار واختبار مستقلة تمييزًا مستقرًا وموثوقًا بين مجموعات HCC وغير HCC بحساسية 95.79٪ و 95.42٪ في مجموعات الاختبار والاختبار الخاصة بـ HCC ، على التوالي.وكانت نسبة الجنسين 95.00٪ و 97.83٪ على التوالي.القيمة التشخيصية لطريقة HIFI أعلى من تلك الخاصة بـ AFP في التمييز بين سرطان الكبد وتليف الكبد.بالإضافة إلى ذلك ، يتم استخدام ctDNA أيضًا في العلاج الجراحي.أتسوشي وآخرونحددت مستويات ctDNA في مصل الدم قبل الجراحة في المرضى الذين يعانون من سرطان الكبد ووجدوا أن معدل التكرار ومعدل ورم خبيث خارج الكبد في المجموعة الإيجابية (كدنا) كانت أعلى بكثير من المجموعة السلبية (كدنا) ، وكانت مستويات (كدنا) مرتبطة بشكل كبير.مع تطور الورم.51 لكونه علامة حيوية عالية الحساسية ، يمكن لـ ctDNA التنبؤ بقدرة HCC على غزو السفن.وانغ وآخرون.إجراء تسلسل الجينوم الكامل لـ 46 مريضًا مصابًا بسرطان الكبد ، وأظهر التحليل متعدد المتغيرات أن القيمة الحدية لتردد أليل متغير (كدنا) للغزو في الأوعية الدقيقة تبلغ 0.83٪ ، والحساسية 89.7٪ والنوعية 80.0٪.عامل خطر مستقل لغزو الأوعية الدموية الدقيقة في سرطان الخلايا الكبدية القابل للاستئصال ، مما يشير إلى أن (كدنا) قد يساعد في توجيه العلاج الأمثل.في الختام ، فإن ctDNA متورط بشكل كامل في حدوث وتطور سرطان الكبد ويمكن استخدامه للفحص المبكر والتقييم الجراحي ومراقبة المرض.
الخلايا الجذعية السرطانية هي خلايا خبيثة مشتقة من الأورام الأولية أو النقائل التي تنتقل إلى مجرى الدم.تفرز الخلايا السرطانية البروتينات المعدنية المصفوفة (MMPs) ، التي تكسر الغشاء القاعدي ، مما يسمح للخلايا السرطانية بالدخول مباشرة إلى الدم والأوعية الليمفاوية.ومع ذلك ، يتم التخلص من معظم الخلايا السرطانية المركزة بسرعة عن طريق anoikis ، أو هجوم مناعي ، أو إجهاد القص.53 يسمح الانتقال الظهاري واللحمة المتوسطة (EMT) بعزل CTCs بسهولة من أنسجة الورم الأولية ، وغزو الشعيرات الدموية ، واكتساب بقاء محسن بشكل ملحوظ ، ورم خبيث ، وغزو ومقاومة للأدوية.أظهرت الدراسات أن هناك عدم تجانس عميق بين الخلايا السرطانية المختلفة في الأورام النقيلية الأولية.وبالتالي ، يمكن أن يؤدي تحليل CTC إلى فهم شامل لعدم تجانس الخلايا السرطانية.54
تشمل العلامات المحددة لـ CTCs المرتبطة بـ HCC glypican-3 (GPC3) ومستقبلات البروتين الأسيوجليكوبي (ASGPR) وجزيء التصاق الخلايا الظهارية (EpCAM) والعلامات المرتبطة بالخلايا الجذعية مثل CD44 و CD90 و 55 وجزيء الالتصاق بين الخلايا 1 (ICAM1).(56) الواسم GPC3 عبارة عن بروتين مرتبط بغشاء الخلية يُستخدم سريريًا للتحليل المرضي وتوصيف HCC.57 يعتبر التعبير عن GPC3 أكثر شيوعًا في خلايا الورم HCC مع تمايز متوسط ​​ومنخفض ويعزز الهجرة خارج الكبد ؛بالإضافة إلى ذلك ، يشير وجود GPC3 + ​​CTCs إلى سرطان الكبد النقيلي.58 ASGPR هو بروتين عبر الغشاء يتم التعبير عنه فقط على سطح خلايا الكبد ويتم التعبير عنه بشكل كبير في سرطان الكبد (HCC) جيد التمايز.يعد EpCAM أحد البروتينات المرتبطة بالغشاء الأكثر استخدامًا لالتقاط CTCs.تم تحديد EpCAM كعلامة سطحية لخلايا HCC ذات خصائص الخلايا الجذعية ، والتي ترتبط بالعديد من السمات السريرية المرضية لـ HCC ، مثل الغزو الوعائي ، ومستويات AFP المقيمة ، والمرحلة المتقدمة من سرطان الكبد في مستشفى برشلونة (BCLC).النمط الظاهري 60 CTC EMT هو النقيلي للغاية.54 عمليات EMT في CTC تعزز ورم خبيث HCC.تمت دراسة التعبير عن علامات EMT مثل vimentin ، و twist ، و E-box zinc finger ملزم (ZEB) 1 ، و ZEB2 ، والحلزون ، والسبائك ، و E-cadherin في CTCs المشتقة من الكبد من مرضى سرطان الكبد.58 نظام CanPatrol ™ الذي طوره Cheng [61] صنف CTCs إلى ثلاث مجموعات فرعية نمطية بناءً على العلامات المعبر عنها في الغالب: النمط الظاهري الظهاري (EpCAM ، CK8 / 18/19) ، النمط الظاهري اللحمة المتوسطة (vimentin ، ملفوف) ، وأنماط ظاهرية مختلطة.في 176 مريضًا ، كان إجمالي CTC متفوقًا على AFP في التفريق بين سرطان الكبد وأمراض الكبد الحميدة.كانت قيم AUC لإجمالي CTC و AFP وإجمالي CTC و AFP مجتمعة 0.774 (95٪ CI ، 0.704–0.834) ، 0.669 (95٪ CI ، 0.587–0.750) ، و 0.821 (95٪ CI ، 0.756-0.886 ).)، على التوالى.يمكن لتصنيف CTC المستند إلى EMT أن يتنبأ بتشخيص سرطان الكبد ، والتكرار المبكر ، والورم الخبيث ، والوقت الإجمالي الأقصر.
حاليًا ، تشمل طرق الكشف عن الخلايا الجذعية السرطانية الطرق الفيزيائية والطرق البيولوجية.تعتمد الطرق الفيزيائية ، التي يشار إليها غالبًا باسم الإثراء القائم على الخصائص الفيزيائية الحيوية ، بشكل أساسي على الخصائص الفيزيائية لـ CSC ، مثل الحجم والكثافة والشحنة والتنقل والتشوه.اعتمادًا على الخصائص الفيزيائية ، هناك طرق مختلفة مثل الأنظمة القائمة على الترشيح ، والرحلان الكهربائي ، وما إلى ذلك. هذا الأخير ، المعروف أيضًا باسم الإثراء القائم على الانجذاب المناعي ، يعتمد أساسًا على ارتباط المستضد بالأجسام المضادة نظرًا لأن الطريقة تستخدم أجسامًا مضادة ضد المؤشرات الحيوية الخاصة بالورم مثل EpCAM و ASGPR ومستقبل عامل نمو البشرة البشري 2 (HER2) ومستضد البروستات المحدد (PSA) والبانسيتوكراتين البشري (P-CK) و carbamoyl phosphate synthase 1 (CPS1).62 نوع آخر ، يسمى طريقة عدم التخصيب ، يستخدم قياس التدفق الخلوي لتمييز الخلايا الجذعية السرطانية عن الكريات البيض بناءً على نسبة وحجم أعلى بين السيتوبلازم.حاليًا ، الاختبار الوحيد المعتمد من قِبل إدارة الأغذية والعقاقير (FDA) للكشف عن CTCs هو نظام Cell-Search ™ ، الذي يستخدم علامة سطح خلية EpCAM. ومع ذلك ، يمكن أن يزيد اكتشاف CTC المستند إلى الواسمات من معدل الإيجابية .54 حقق خليط من الأجسام المضادة ضد ASGPR و CPS1 معدل اكتشاف CTC بنسبة 91٪ في مرضى سرطان الكبد .63 استخدم Zhang et al شريحة CTC مع أجسام مضادة ضد ASGPR و P -CK و CPS1 ، ومرضى سرطان الخلايا الكبدية المتمايزين عن مرضى الكبد الحميدة أو غير المصابين بسرطان الخلايا السرطانية بنسبة 100٪ .64 كشفت دراسة قام بها وانغ عن وجود EpCAM + CTCs في 60٪ من 42 مريضًا بسرطان الكبد ووجدت ارتباطات كبيرة بين كل من الإيجابية. معدل وعدد CTCs مع مرحلة TNM. 65 وجد Guo et al أن درجة PCR المشتقة من CTC كانت مرتفعة في 125/171 (73 ٪) من المرضى الذين كان مستوى AFP لديهم أقل من 20 نانوغرام / مل مع حساسية 72.5 ٪ و a 95.0٪ ، مقارنة بـ 57.0٪ و 90.0٪ لـ AFP عند قطع 20 نانوغرام / مل .66 قد يؤدي الجمع بين AFP و CTCs إلى تحسين اكتشاف سرطان الكبد. معرضة لخطر الإصابة بسرطان الكبد. ومع ذلك ، يمكن أن يزيد اكتشاف CTC المستند إلى الواسمات من معدل الإيجابية .54 حقق خليط من الأجسام المضادة ضد ASGPR و CPS1 معدل اكتشاف CTC بنسبة 91٪ في مرضى سرطان الكبد .63 استخدم Zhang et al شريحة CTC مع أجسام مضادة ضد ASGPR و P -CK و CPS1 ، ومرضى سرطان الخلايا الكبدية المتمايزين عن مرضى الكبد الحميدة أو غير المصابين بسرطان الخلايا السرطانية بنسبة 100٪ .64 كشفت دراسة قام بها وانغ عن وجود EpCAM + CTCs في 60٪ من 42 مريضًا بسرطان الكبد ووجدت ارتباطات كبيرة بين كل من الإيجابية. معدل وعدد CTCs مع مرحلة TNM. 65 وجد Guo et al أن درجة PCR المشتقة من CTC كانت مرتفعة في 125/171 (73 ٪) من المرضى الذين كان مستوى AFP لديهم أقل من 20 نانوغرام / مل مع حساسية 72.5 ٪ و a 95.0٪ ، مقارنة بـ 57.0٪ و 90.0٪ لـ AFP عند قطع 20 نانوغرام / مل .66 قد يؤدي الجمع بين AFP و CTCs إلى تحسين اكتشاف سرطان الكبد. معرضة لخطر كبير للإصابة بسرطان الكبد.ومع ذلك ، قد يؤدي الاكتشاف المشترك القائم على الواسمات لـ CTCs إلى زيادة النسبة المئوية للنتائج الإيجابية .54 حقق مزيج من الأجسام المضادة لـ ASGPR و CPS1 معدل اكتشاف CTC بنسبة 91 ٪ في المرضى الذين يعانون من سرطان الكبد .63 Zhang et al.استخدم رقاقة CTC مع أجسام مضادة ضد ASGPR و P-CK و CPS1 ، وميزت أيضًا المرضى المصابين بسرطان الكبد عن مرضى الكبد الحميد أو غير المصابين بسرطان الكبد بمعدل 100٪.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. تواتر وعدد CTCs مع مرحلة TNM. 65 وجد Guo وآخرون أن PCR المشتق من CTCs كان مرتفعًا في 125/171 (73 ٪) من المرضى الذين لديهم مستويات AFP أقل من 20 نانوغرام / مل مع حساسية 72.5 ٪ وخصوصية 95.0٪ مقارنة بـ 57.0٪ و 90.0٪ لـ AFP عند مستوى قطع 20 نانوغرام / مل .66 قد يؤدي الجمع بين AFP و CTCs إلى تحسين اكتشاف سرطان الكبد .45 تعتبر CTCs تتمتع بميزة على AFP في الفحص المبكر مجموعات.مع ارتفاع مخاطر الإصابة بسرطان الكبد.ومع ذلك ، فإن الاكتشاف المشترك القائم على الواسمات للـ CTCs قد يزيد من نسبة النتائج الإيجابية.54 حقق مزيج من الأجسام المضادة لـ ASGPR و CPS1 معدل الكشف عن CTC بنسبة 91 ٪ في مرضى سرطان الكبد.63 زانج وآخرون.استخدام رقائق CTC مع الأجسام المضادة ضد ASGPR و P-CK و CPS1 وميزت المرضى المصابين بسرطان الكبد من أمراض الكبد الحميدة وغير المصابين بسرطان الكبد بنسبة 100٪.حددت دراسة 64 Wang 60 ٪ من EpCAM + CTCs في 42 مريضًا من سرطان الكبد ووجدت ارتباطًا مهمًا بين حدوث وعدد CTCs في مرحلة TNM. 65 قوه 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 نانوغرام / مل 的 125/171 (73٪) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 升高 ， 敏感性 为 72.5٪ ， 特异性 为 95.0٪ ， 而 AFP 在 截止值为 20 نانوغرام / مل 时 的 特异性 为 57.0٪ 和 90.0٪ 65 جو 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 نانوغرام / مل 的 125/171 (73٪) 名 患者 ， ， ctc pcr 评分 敏感性 敏感性 为 72.5٪ ， 为 95.0٪ AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 值为 20ng / mL 时 的 特异性 为 57.0٪ 和 90.0٪65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг / мл. وجد أنه في 125/171 (73٪) من المرضى الذين لديهم مستويات AFP أقل من 20 نانوغرام / مل ، ارتفعت قيم تفاعل البوليميراز المتسلسل المشتق من CTC بحساسية 72.5٪ وخصوصية 95.0٪ ، بينما كان AFP عند خصوصية القطع كان 20 نانوغرام / مل.كان ml 57.0٪ و 90.0٪.66 يحسن الجمع بين ORP و CTC من اكتشاف سرطان الكبد.يُعتقد أن 45 CTCs متفوقة على AFP في الفحص المبكر لمجموعات سرطان الكبد عالية الخطورة.وبالتالي ، بالنسبة لمجموعات سرطان الخلايا الكبدية الإيجابية وعالية الخطورة ، يجب دمج اختبار CTC بشكل روتيني مع الكشف عن الموجات فوق الصوتية وكشف AFP.ومع ذلك ، تعتبر CTCs منبئات مهمة لورم خبيث وتكرار الورم ، ولا يوصى باكتشاف CTCs بشكل مستقل كأداة تشخيصية.62 لذلك ، قد يعمل CTC كمؤشر بيولوجي تنبؤي أفضل من الواسمات الأخرى المستخدمة حاليًا. وجد Zhou et al أن المرضى الذين لديهم أعداد مرتفعة من EpCAM + CTCs والخلايا التائية التنظيمية أظهروا خطرًا أعلى لتكرار الإصابة بسرطان الكبد ، مقارنةً بأولئك الذين لديهم أعداد منخفضة من CTCs ، مع نسبة تكرار تبلغ 66.7٪ مقابل 10.3٪ (P <0.001). تم الإبلاغ عن دراسة مماثلة بواسطة Zhong et al. 68 بالإضافة إلى ذلك ، وجد Qi أن 101 من 112 مريضًا (90.81٪) مصابين بسرطان الكبد ، بما في ذلك أولئك المصابون بمرض في مرحلة مبكرة ، كانوا إيجابيين لـ CTCs وأنه تم اكتشاف عقيدات HCC الصغيرة جدًا بعد 3 حتى 5 أشهر من المتابعة. وجد Zhou وآخرون أن المرضى الذين لديهم أعداد مرتفعة من EpCAM + CTCs والخلايا التائية التنظيمية أظهروا خطرًا أعلى للإصابة بتكرار سرطان الكبد HCC من أولئك الذين لديهم أعداد منخفضة من CTCs ، مع نسبة تكرار تبلغ 66.7٪ مقابل 10.3٪ (P <0.001) .67 A تم الإبلاغ عن دراسة مماثلة من قبل Zhong et al. 68 بالإضافة إلى ذلك ، وجد Qi أن 101 من 112 مريضًا (90.81٪) مصابين بسرطان الكبد ، بما في ذلك مرضى المرحلة المبكرة ، كانوا إيجابيين لـ CTCs وأن عقيدات سرطان الخلايا الكبدية الصغيرة جدًا تم اكتشافها بعد 3 إلى 5 أشهر من المتابعة. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. وجد Zhou et al أن المرضى الذين يعانون من ارتفاع EpCAM + CTCs والخلايا التائية التنظيمية لديهم مخاطر أعلى لتكرار سرطان الخلايا الكبدية من أولئك الذين يعانون من انخفاض CTCs ، بمعدل تكرار يبلغ 66.7 ٪ مقابل 10.3 ٪ (P <0.001).تم إجراء دراسة مماثلة بواسطة Zhong et al.68. بالإضافة إلى ذلك ، وجد Qi أن 101 من أصل 112 مريضًا (90.81٪) مصابين بسرطان الكبد ، بما في ذلك أولئك المصابون بمرض مبكر ، لديهم خلايا سرطان الكبد ، وتم اكتشاف عقيدات سرطان الخلايا الكبدية الصغيرة جدًا بعد 3 إلى 5 أشهر من المتابعة. زو 等 人 发现 ， 与 CTC 数量 较少 的 患者 相比 ， EpCAM + CTC 和 调节 性 T 细胞 数量 升高 的 患者 发生 HCC 复发 的 风险 更高 ， 复发 率 分别 66.7٪ 10.3٪ (P <0.001)。 تشو 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam + ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 hcc 复发 风险 更 ， 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为٪ (为 为 10.3 ف <0.001) 。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). تشو وآخرون.وجد أن المرضى الذين يعانون من ارتفاع EpCAM + CTCs والخلايا التائية التنظيمية لديهم مخاطر أعلى لتكرار سرطان الكبد مقارنةً بالمرضى الذين يعانون من عدد أقل من CTCs ، مع معدلات تكرار تبلغ 66.7 ٪ و 10.3 ٪ على التوالي (P <0.001).تم الإبلاغ عن دراسة مماثلة بواسطة Zhong et al.68 بالإضافة إلى ذلك ، وجد Qi أن 101 من 112 مريضًا بسرطان الكبد (90.81٪) ، بما في ذلك المرضى الذين يعانون من مرض مبكر ، لديهم نتائج إيجابية لـ CTC ووجدوا عقيدات HCC صغيرة جدًا بعد 3 زيارات.المراقبة تصل إلى 5 أشهر.ووجدوا أيضًا الخلايا الجذعية السرطانية في 12 مريضًا مصابًا بعدوى مزمنة بفيروس التهاب الكبد الوبائي ووجدوا أورام HCC صغيرة في غضون 5 أشهر في 2 من المرضى المصابين بفيروس التهاب الكبد الوبائي.69 وبالتالي ، يمكن استخدام مركبات الكربون الكلورية فلورية للتنبؤ بسرطان الكبد ، 70 ولكن يمكن استخدامها بشكل روتيني كمؤشرات حيوية تنبؤية.
مثل cfDNA ، يتم إطلاق cfRNA في مجرى الدم من خلال أنظمة مختلفة.تمثل هذه الجزيئات في الدم المحيطي الأنسجة السرطانية الأصلية.مقارنة بالعلامات التي تم اكتشافها بواسطة الطرق غير الغازية ، فإن cfRNAs أكثر تنظيماً ديناميكيًا ، خاصة بالأنسجة ، ووفرة في البيئة خارج الخلية.تم الإبلاغ عن الأهمية والقيمة التشخيصية لـ 71 miRNAs (miRNAs) في سرطان الكبد في العديد من الدراسات.miRNAs هي رنا داخلية المنشأ غير مشفرة (ncRNAs) تنظم الأنشطة البيولوجية الجزيئية المختلفة عن طريق تثبيط ترجمة الرنا المرسال المستهدف (mRNAs).توجد miRNAs في أجسام موت الخلايا المبرمج مغلفة في exosomes ، ولكن يمكنها أيضًا الارتباط بثبات ببروتينات المصل والدهون في الدم المحيطي ويمكن استخدامها لتقييم سرطان الكبد.تشارك microRNAs في تجديد الكبد ، واستقلاب الدهون ، والاستماتة ، والالتهاب ، وتطور سرطان الكبد.72 mRNAs الأورام مثل miR-21 و miR-155 و miR-221 معروفة جيدًا في سرطان الكبد.على وجه الخصوص ، يلعب miR-21 دورًا رئيسيًا في تخليق الكولاجين في المصفوفة خارج الخلية والتليف ويعزز التسرطن الكبدي عن طريق تنشيط الخلايا الجذعية المكونة للدم.72.73 من miRNAs لقمع الورم في HCC تشمل miRNA-122 و miRNA-29 وعائلة Let-7 وعائلة miRNA-15.تتكون عائلة Let-7 من العديد من miRNAs الكابتة للورم والتي تستهدف عائلة RAS.تشتمل عائلة miR-15 على miR-15a و miR-15b و miR-16 و miR-195 و miR-497 ، والتي لها تسلسلات تكميلية لبعض الرنا المرسال.بالإضافة إلى ذلك ، فإن الحمض النووي الريبي الطويل غير المشفر (lncRNAs) والحمض النووي الريبي الدائري (cirRNAs) مهمان أيضًا للفحص المبكر لـ HCC.تمثل lncRNAs أوسع فئة من ncRNAs ، بما في ذلك ncRNAs التي تشبه mRNA ، وتشارك في التسبب في العديد من الأمراض البشرية.تلعب LncRNAs دورًا تنظيميًا في البيئة المكروية للكبد وأمراض الكبد المزمنة.74 الحلقات الحلقية هي أيضًا فئة من ncRNAs لها وظائف متعددة في تنظيم التعبير الجيني.في الآونة الأخيرة ، تم اعتبار الجزيئات الحلقية كأدوات تشخيصية لمرض سرطان الكبد.
يتمتع الحمض النووي الريبي الحر المنتشر باستقرار ملحوظ ، بما في ذلك مقاومة درجات الحرارة ودرجة الحموضة و RNase ، مما يجعل عزل fnRNA عن الدم المحيطي أقل مللًا باستخدام طرق تنقية RNA القياسية.تشمل الطرق الأكثر استخدامًا NGS و microarray و RT-qPCR.NGS يسمح بقياس microRNAs في جميع أنحاء الجينوم.ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة باهظة الثمن والتحليل غير موحد.في المقابل ، يعتبر RT-qPCR غير مكلف ، ويضخم بسرعة الأحماض النووية ، ويقدم العديد من المزايا مثل الحساسية العالية ، والدقة العالية ، والنطاق الديناميكي الأوسع ، ويتطلب عينات أقل.المصفوفات الدقيقة هي طريقة أخرى مستخدمة للكشف عن ميرنا بناءً على تهجين حساس ومحدد للـ miRNAs المستهدفة مع تحقيقات الحمض النووي التكميلية 75 ، لكن تحليل بيانات المصفوفات الدقيقة يستغرق وقتًا طويلاً.
تم الإبلاغ عن أن تعميم miR-122 و Let-7 قد يكون مفيدًا في تشخيص المرحلة المبكرة من سرطان الكبد في المجموعات المعرضة لخطر كبير ، والعلامات في المرضى الذين يعانون من العقيدات السابقة للخلايا المرتبطة بفيروس التهاب الكبد B والمرحلة المبكرة من سرطان الكبد.76 كاي وآخرون.وجد أن أفراد عائلة Let-7 (miR-92 و miR-122 و miR-125b و miR-143 و miR-192 و miR-16 و miR-126 و miR-199a / b) معرضون لخطر الإصابة المزمنة سرطان الكبد في مرضى التهاب الكبد.يمكن لعائلة Let-7 أن تعمل كمؤشر حيوي بديل فعال للتنبؤ بتطور سرطان الكبد في المجموعات المعرضة لخطر كبير المرتبطة بالتهاب الكبد المزمن C. تتمتع 77 miR-122 بدقة عالية في التشخيص في الكشف المبكر عن سرطان الكبد في مرضى تليف الكبد.تم أيضًا تقييم 78 مصل MiR-107 المتداول في المراحل المبكرة من سرطان الكبد ، 79 وأظهر إمكانات جيدة في المجموعات المعرضة لمخاطر عالية.أفاد Zhou et al أن لوحة من miRNAs (miR-122 و miR-192 و miR-21 و miR-223 و miR-26a و miR-27a و miR-801) يمكنها التفريق بين سرطان الكبد والتهاب الكبد المزمن B (CHB) والتليف الكبدي. كانت الحساسية 79.1٪ و 75٪ والنوعية 76.4٪ و 91.1٪ على التوالي.80 في سرطان الكبد المرتبط بفيروس التهاب الكبد B ، وجدنا أن مستويات miR150 قد انخفضت بشكل ملحوظ مقارنة بتلك الموجودة في مرضى HBV المزمن دون HCC (الحساسية 79.1٪ ، النوعية 76.5٪).كان -224 مرتفعًا في سرطان الكبد مقارنةً بالضوابط الصحية ، وأظهرت تحليلات المجموعات الفرعية مستويات أعلى في مرضى سرطان الكبد المرتبط بفيروس التهاب الكبد B.حدد مرضى تليف الكبد المرتبط بالتهاب الكبد B ومرضى سرطان الكبد (HCC) مُصنِّف siRNA يحتوي على سبعة siRNAs معبر عنها تفاضليًا يمكنها اكتشاف سرطان الكبد في الضوابط المختلفة ؛نطاق الجامعة الأمريكية بالقاهرة في الفحص المبكر أفضل من متطوعي وكالة فرانس برس.ووجدوا أن أربعة جزيئات من الحمض النووي الريبي (miR-1972 و miR-193a-5p و miR-214-3p و miR-365a-3p) يمكن أن تميز المرضى المصابين بسرطان الكبد عن المرضى الذين لا يعانون من سرطان الكبد.تعتبر خمسة ميرناس مفرطة التعبير (miR-122-5p ، miR-125b-5p ، miR-885-5p ، miR-100-5p ، و miR-148a-3p) عدوى محتملة بفيروس التهاب الكبد B في سرطان الكبد ، وتليف الكبد ، ومؤشرات CHB الحيوية ، خاصة قد تكون miR-34a-5p مؤشرات حيوية لتليف الكبد ، 85 وقد تكون مؤشرات حيوية محتملة للفحص المبكر لـ HCC في المجموعات المعرضة للخطر.يتم تنشيط lncRNA الأكثر دراسة في سرطان الكبد بشكل كبير في سرطان الكبد (HULC).أظهرت دراسات أخرى أن HULC المنتشر في مرضى سرطان الكبد يمكن استخدامه كعلامة تشخيصية لأن هذا lncRNA منظم بدرجة عالية في مرضى سرطان الكبد مقارنة بالأفراد الأصحاء.71،86 من بين lnRNAs الأخرى ، يعتبر LINC00152 أفضل lncRNA للتشخيص نظرًا لارتفاع AUC وحساسية وخصوصية.86 في إحدى الدراسات ، زاد تعبير الدم المحيطي لـ LINC00152 تدريجيًا من الضوابط الصحية العادية إلى مرضى CHB وتليف الكبد ، وأخيرًا كان أعلى في سرطان الكبد.أظهرت الدراسات التي أجريت على التعبير عن سيرسمارك 5 في بلازما مرضى سرطان الكبد (HCC) انخفاضًا تدريجيًا في التعبير في سرطان الكبد (HCC) بدءًا من التهاب الكبد إلى تليف الكبد والآفات محتملة التسرطن.أكد تحليل منحنيات ROC قدرة هذه الحلقات في تمييز المرضى المصابين بالتهاب الكبد أو تليف الكبد عن أولئك المصابين بسرطان الكبد ، وخاصة أولئك الذين لديهم مستويات ألفا أقل من 200 نانوغرام / مل.بالإضافة إلى ذلك ، قام Zhu بتحليل 13،617 من الحمض النووي الريبي الدوري في عينات البلازما من مرضى سرطان الكبد المرتبط بفيروس التهاب الكبد B وأكد أن 6 من الحمض النووي الريبي الدوري تم التعبير عنها بشكل مختلف في تليف الكبد المرتبط بـ HCC و HBV ، مما يشير إلى أن cRNAs قد تكون مفيدة.علامات للفحص المبكر للمجموعات عالية الخطورة مثل تلك المرتبطة بأمراض الكبد ومرضى التصلب.88
Exosomes عبارة عن حويصلات غشائية يبلغ قطرها 40-160 نانومتر ؛تندمج الحويصلات المتعددة داخل الخلايا مع غشاء الخلية ويتم إطلاقها في المصفوفة خارج الخلية.تحتوي على العديد من المكونات النشطة ، بما في ذلك الدهون والبروتينات والحمض النووي الريبي والحمض النووي ، وتلعب دورًا رئيسيًا في الاتصال بين الخلايا ، سواء الخلايا السرطانية أو غير خلايا سرطان الكبد.تنظم 89،90 Exosomes تطور سرطان الكبد عن طريق تنشيط الخلايا الليفية والخلايا النجمية والخلايا المناعية وخلايا الكبد الطبيعية وخلايا سرطان الكبد.91 في البيئة الدقيقة للورم ، تنتج الخلايا السرطانية عددًا كبيرًا من exosomes التي يتم نقلها من الخلايا السرطانية إلى الخلايا غير الناضجة ، والتي بدورها تشارك في تكوين الورم ، والتدهور ، والإشارات الخلوية.92 دراسة أظهرت أن exosomes يمكن أن تنقل الجينات المسرطنة إلى الخلايا الطبيعية أثناء العمليات المرضية ، والتي قد تكون إحدى آليات غزو الورم والورم الخبيث.93 قد يكون دور exosomes في تطور السرطان ديناميكيًا ومخصصًا لنوع السرطان ، وقد يتم استيعاب 89 Exosomes بواسطة خلايا مجاورة أو بعيدة لتنظيم جينات مستهدفة متعددة في الخلايا المتلقية التي قد تكون متورطة في أيونات الاتصال بين الخلايا وتفاعلات البيئة المكروية الخلوية ، التوسط في الإشارات الخلوية والتمثيل الغذائي.94 الخصائص والتغيرات الديناميكية لجزيئات البضائع الخارجية تعكس بشكل مباشر الخصائص والتغيرات الديناميكية لخلايا الورم الأبوي ، 95 وهو أيضًا الأساس لاستخدام exosomes في تشخيص السرطان والتنبؤ به ، وكذلك للتنبؤ بالاستجابة الفردية للعلاج المضاد للسرطان ..96
الطرق المخبرية التقليدية لعزل وتحليل exosomes معقدة ومتعددة الخطوات وتستغرق وقتًا طويلاً ، بما في ذلك التنبيذ الفائق ، والترشيح ، وكروماتوجرافيا استبعاد الحجم ، وتنقية الانجذاب المناعي ، والنشاف الغربي ، ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) ، و PCR ، وتحليل التدفق.يتم تطوير الأنظمة المصغرة والمنصات المختبرية على رقاقة باستخدام تقنية النانو / الدقيقة على نطاق واسع من أجل عزل سريع ومريح في الموقع من exosomes.تحليل تتبع الجسيمات النانوية (NTA) هو طريقة مستخدمة على نطاق واسع لتوصيف حجم وتركيز الإكسوسومات ، بما في ذلك طرق مثل الجسيمات النانوية المغناطيسية و polyhydroxyalkanoates.يمكن أيضًا للطرق الميكروفلويدية والكهروكيميائية الكشف بسرعة عن الإكسوسومات ذات الغلات العالية.
البروتينات الخارجية هي علامات مهمة لتشخيص سرطان الكبد.في دراسة Arbelaiz ، تم رفع مستوى 98 بروتين رابط RasGAP SH3 (G3BP) ومستقبل الغلوبولين المناعي البوليمر (PIGR) بشكل ملحوظ في exosomes المشتقة من HCC ، وكانت الفعالية المشتركة المفترضة للبروتينين أعلى من تلك الخاصة بـ AFP.يعتبر الحمل الزائد للحديد عاملاً مهمًا يساهم في تطور سرطان الكبد.ذكر تسنغ أن الهيبسيدين قد يلعب دورًا رئيسيًا في مقاومة سرطان الكبد.99 Exosomes مشتقة من مصل مرضى سرطان الكبد كان لديهم عدد نسخ أعلى بكثير من متغيرات الهيبسيدين mRNA من نظرائهم الأصحاء ، مما يشير إلى أن الهيبسيدين قد يكون علامة بيولوجية تشخيصية جديدة لـ HCC.يمكن أن يقلل البروتين 14-3-3 الموجود في exosomes الذي ينتجه 100 HCC من تنشيط الخلايا التائية وتكاثرها وتمايزها ويمكن أن يحفز تحول الخلايا التائية إلى خلايا T تنظيمية ، مما يؤدي إلى استنفاد الخلايا التائية.101 هذا مدعوم من قبل العديد من الدراسات التي تبحث في تهرب الورم من المراقبة المناعية ، 102 والتي قد تساهم في تكوين أورام سرطان الكبد.
بالإضافة إلى وجود ecRNA في البلازما أو المصل ، يمكن استخدام exosomes المخصب بالـ RNA للتدريج غير الجراحي في الوقت الحقيقي في فحص الورم المبكر ولتحديد تطور الورم والاستجابة للعلاج.كان مستوى mRNA-21 الخارجي في مصل الدم في مجموعة سرطان الكبد أعلى بمقدار 2.21 مرة عن مجموعة CHB ، وفي مجموعة سرطان الكبد كان 5.57 مرة أعلى من السكان الأصحاء.في دراسة وانج ، زادت exosomes بشكل كبير من سرطان الكبد مقارنة بمرضى تليف الكبد بقيم AUC تبلغ 0.83 (95٪ CI 0.74-0.93) و 0.94 (95٪ CI 0.88-1.00).104 أوضحت البيانات التي تم الحصول عليها مشاركة جزيئات البضائع الخارجية المحددة في تنظيم تكوين الورم وتطور سرطان الكبد.105 التعبير المصل لـ miR-221 و miR-103 و miR-181c و miR-181a و miR-93 و miR-26a متسق.والورم الخبيث ، ومستويات miR21 أعلى بكثير في مرضى سرطان الكبد مقارنة بالضوابط الصحية وأيضًا في مرضى CHB .102 كان للـ LncRNA قيمة تشخيصية محتملة في سرطان الكبد.أظهرت الدراسات أن exosomes المستمدة من مصل مرضى سرطان الكبد تحتوي على مستويات أعلى بكثير من LINC00161 و LINC000635 و lncRNA التي يتم تنشيطها عن طريق تحويل عامل النمو β مقارنة بالمرضى الذين لا يعانون من سرطان الكبد ، وترتبط هذه lncRNAs بقوة بمرحلة TNM وحجم الورم.110 Conigliaro et al.تم العثور على إكسوسومات CD90 + للتعبير عن مستويات عالية من lncRNAH19 ، مما أدى إلى زيادة كبيرة في إطلاق عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF) وإنتاج مستقبلات VEGF-R1 ، وبالتالي تحفيز تكوين الأوعية.93 CircRNAs هي نوع آخر من ncRNAs الخارجية - يتم التعبير عنها بمستويات أقل ولكن مستقرة عبر الأنواع ، كما تُظهر الجزيئات الحلقية خصوصية لنوع الخلية ونوع الأنسجة ومرحلة النمو والنشاط التنظيمي.111 الحمض النووي الريبي هي مؤشرات حيوية تشخيصية للسرطان المبكر وسرطان الحد الأدنى من التدخل الجراحي.112 أظهرت التجارب السريرية الحديثة أن خصوصية الجزيئات المجهرية الفردية في التنبؤ بسرطان الكبد ليست مثالية.لذلك ، قد يؤدي الاكتشاف المعقد باستخدام فحوصات متعددة (على سبيل المثال ، miR-122 و miR-48a بالاشتراك مع AFP) إلى تحسين التعرف على سرطان الكبد المبكر وتمييز سرطان الكبد عن تليف الكبد.100
المرضى الذين يعانون من CHB وتليف الكبد هم أكثر المجموعات المعرضة لخطر الإصابة بسرطان الكبد.بالنسبة للفئات عالية الخطورة ، بمجرد تحقيق استجابة فيروسية مستدامة ، يجب تطوير استراتيجية مراقبة فعالة من حيث التكلفة تعتمد على مخاطر سرطان الكبد ، والفحص المبكر هو المفتاح لتحسين تشخيص وعلاج سرطان الكبد مع نسبة عالية من الفعالية من حيث التكلفة 2 ..طرق الفحص المبكر للسرطان لها العديد من القيود: لم يتم تطوير طرق الفحص المبكر الفعالة لمعظم أنواع السرطان ، وعادة ما يكون الالتزام منخفضًا.بالمقارنة مع طرق الفحص المبكر التقليدية ، تتمتع تقنية الخزعة السائلة بمزايا واضحة: سهولة أخذ العينات ، واكتشاف بانراك ، واستنساخ العينات بشكل جيد ، والاستجابة الفعالة لعدم تجانس الورم.نظرًا للفعالية من حيث التكلفة للطرق المرتبطة بالخزعة السائلة ، لم يتم اختبار استخدامها في فحص سرطان الكبد بشكل روتيني.على الرغم من التقدم في الكشف الدقيق على المستوى الجزيئي ، فإن خزعة السوائل مكلفة للكشف عن سرطان الكبد في المرضى المستهدفين ، مما يحد من استخدامها على نطاق واسع مقارنة بإجراءات التصوير المحددة مثل الموجات فوق الصوتية والتصوير بالرنين المغناطيسي.113،114 ومع ذلك ، أظهرت دراسة سابقة أن الخزعة السائلة أظهرت فائدة كبيرة من حيث سنوات العمر المعدلة الجودة (QALYs).115 كما تم عرض فوائد الخزعة السائلة في سرطان المعدة والبلعوم الأنفي المبكر.116117 الرأي الحالي هو أن الخزعة السائلة يمكن أن تكمل المؤشرات الحيوية في المصل والفحص الإشعاعي في اكتشاف وتشخيص الأورام.117118
وفقًا للأدبيات الحالية ، أظهرت تقنية خزعة السوائل حساسية وخصوصية أعلى بشكل ملحوظ في الفحص المبكر للمجموعات المعرضة لخطر الإصابة بسرطان الكبد.بغض النظر عن نوع خزعة السوائل ، يمكن أن تميز سرطان الخلايا الكبدية عن الأفراد المعرضين لمخاطر عالية دون سرطان الكبد ، مما يشير إلى أهمية الفحص المبكر حيث أن الفروق بين الأفراد المعرضين للخطر والأفراد الأصحاء واضحة.تتمتع ctDNA بنصف عمر قصير ويمكن استخدامها للكشف عن سرطان الكبد ، لذا فإن أي تغييرات في cDNA المشتق من الورم يمكن أن توفر دليلًا ملموسًا في الوقت الفعلي على تطور الورم ، خاصة بالنسبة للأورام الصغيرة.يشير المستوى المرتفع من ctDNA إلى تطور وانتشار السرطان وهو مؤشر مبكر للتقدم والتكرار.بالإضافة إلى ذلك ، بناءً على نتائج ctDNA ، يمكن للمرضى تلقي العلاج والمتابعة الفرديين.119 قد تكون مواقع مثيلة محددة علامة أفضل من AFP للتعرف المبكر على سرطان الكبد والعقيدات التليفية.في الحالات القابلة للإزالة من سرطان الكبد ، تشير المستويات العالية من (كدنا) إلى غزو الأوعية الدموية الدقيقة وتكرار ما بعد الجراحة والانبثاث.ترتبط التغييرات في عدد النسخ ببقاء المرضى المصابين بسرطان الكبد على قيد الحياة.يمكن افتراض أن تقييم (كدنا) قد يكون متورطًا في العلاج الشامل لسرطان الخلايا الكبدية ، ويمكن أن يكون (كدنا) بمثابة مؤشر فعال للتعديل العلاجي.تم اعتماد الواسمات المستندة إلى طفرات جينية محددة في ctDNA من خلال الإرشادات السريرية للتنبؤ بالفعالية ومراقبة مقاومة الأدوية.قد يكون اختبار ctDNA هو أداة الخزعة السائلة الأكثر فائدة للفحص المبكر.تلعب CTCs أيضًا دورًا رئيسيًا في الفحص المبكر لمجموعات سرطان الكبد عالية الخطورة.تعد الواسمات المختلفة لمركبات الكربون الكلورية فلورية المرتبطة بسرطان الخلايا الكبدية ذات أهمية خاصة في ظهور سرطان الخلايا الكبدية وتطوره وتكراره.كحويصلات غشائية ، تشارك exosomes في الاتصالات بين الخلايا ، خاصة في خلايا سرطان الكبد.الحمض النووي الريبي الدقيق المنتشر ثابت في الدم ، وبالتالي قد يكون أكثر فائدة في الفحص المبكر لـ HCC.تدريجيًا ، تم اكتشاف البروتينات الخارجية والإكسوسومات الغنية بالـ RNA ، وتم تأكيد فعاليتها التنبؤية لـ HCC.ومن المثير للاهتمام ، أن المسببات المختلفة لـ HCC قد ترتبط أيضًا بطفرات مختلفة ، لذلك يمكننا اختيار مؤشرات حيوية مختلفة للفحص المبكر بناءً على مسببات مختلفة لـ HCC.120
ومع ذلك ، فإن تقنيات خزعة السوائل الحالية مشكوك فيها من حيث الثبات ولا يمكنها إجراء فحص مبكر أو مراقبة سرطان الكبد بشكل مستقل ، ولكن لا يزال بإمكانها استكمال الفحص والتشخيص الفردي.121 كشكل من أشكال الخزعة السائلة ، فإن اكتشاف وتصوير ctDNA و CTC و cfRNA و AFP أو PIVKA-II المرتبط بالجزيوم لها تطبيقات واعدة في التشخيص المبكر والتنبؤ بسرطان الكبد.ومع ذلك ، لا يزال يتعين توضيح الآلية الدقيقة لإطلاق ctDNA في الدم.قد يسهل الكشف عن الخصائص البيولوجية الأساسية للـ ctDNA استخدامها كعلامة.تشكل الكمية الصغيرة من ctDNA في التداول ومتطلبات معالجة العينات الصارمة تحديات أمام التنفيذ السريري لاكتشاف cDNA في HCC.بالإضافة إلى ذلك ، لا تحتوي الطفرات الجينية على سمات محددة تسمح بالتعرف الدقيق على المواد المسرطنة.نظرًا لوجود العديد من المتغيرات الجينية والجسدية أيضًا في الأنسجة الطبيعية ، فقد تكون الطفرات الجينية التي تم تحديدها بواسطة خزعة السوائل ذات فائدة محدودة في الفحص المبكر لـ HCC.122 تعتبر القيود المفروضة على أهداف الجينات المفيدة المحددة جيدًا والعلامات الحيوية التي تساعد على تمييز الحمض النووي الريبي النووي (cDNA) عن الحمض النووي غير الورمي من أهم القضايا في استخدام (كدنا).عدم وجود فائدة من العلامات الحساسة والمحددة للكشف عن مركبات الكربون الكلورية فلورية.تم العثور على الخلايا القابلة للحياة ذات الإمكانات النقيلية فقط ، ولم يكن المزيج الأمثل للعلامات المخصبة CSC واضحًا.يعد عزل CTCs للثقافة وتقييم ملامحها الطفرية مهمة صعبة أيضًا.نظرًا لمشاكل تحديد وعزل وتنقية الإكسوسومات ، فإن الآلية الجزيئية المحددة لا تزال غير واضحة ، والدراسات السابقة حول آلية الإكسوسومات و HCC لم تكن متعمقة ، وطريقة فرز miRNAs و lncRNAs والبروتينات في exosomes ، وليس من الواضح ما إذا كان امتصاص الجسيمات الخارجية هو عملية من النوع المحدد.لا يزال استخدام exosomes لتشخيص وعلاج سرطان الكبد في مرحلة ما قبل السريرية.قد يؤدي الافتقار إلى توحيد إجراءات الخزعة السائلة ، مثل نوع الأنابيب المستخدمة لجمع الدم ، وحجم الدم ، وتخزين العينات والكشف عنها ، والعزل والإثراء ، إلى منع استخدامها في الممارسة السريرية الروتينية بسبب الاختلافات في الممارسات عبر المراكز الطبية.لا يزال يتعين استكشاف فعالية الخزعة السائلة في الفحص المبكر والتشخيص وتقييم الفعالية والتنبؤ بسرطان الكبد ، خاصة بالنسبة للفئات المعرضة للخطر.تتمتع تقنية الخزعة السائلة بإمكانيات كبيرة ومن المتوقع استخدامها على نطاق واسع في الممارسة السريرية لسرطان الكبد في المستقبل القريب.
1. Sung H. ، Furley J. ، Siegel RL et al.إحصاءات السرطان العالمية 2020: يقدر GLOBOCAN معدل الإصابة والوفيات من 36 نوعًا من السرطان في 185 دولة.CA السرطان ياء كلين.2021 ؛ 71 (3): 209-249.دوى: 10.3322 / caac.21660
2. مقر الهيئة الوطنية للصحة.معايير تشخيص وعلاج سرطان الكبد الأولي (طبعة 2022) [J].مجلة أمراض الكبد السريرية ، 2022 ، 38 (2): 288-303.دوى: 10.3969 / j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J ، Sun H ، Wang Z ، et al.إرشادات لتشخيص وعلاج سرطان الخلايا الكبدية (إصدار 2019).سرطان الكبد.2020 ؛ 9 (6): 682-720.دوى: 10.1159 / 000509424
4. Kokudo N و Takemura N و Hasegawa K et al.إرشادات الممارسة السريرية لسرطان الخلايا الكبدية: الجمعية اليابانية لأمراض الكبد ، 2017 (إرشادات JSH-HCC 4th) ، تحديث 2019.خزان أمراض الكبد.2019 ؛ 49 (10): 1109-1113.دوى: 10.1111 / hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA، Fernandez-Garza LE، Barrera-Barrera SA خزعة سائلة في أمراض الكبد المزمنة.آن هيباتو.2021 ؛ 20: 100197.دوى: 10.1016 / j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu.، Tan P.Kh.خزعة سرطان الثدي السائل: مراجعة مركزة.قوس باثول لاب ميد.2021 ؛ 145 (6): 678-686.دوى: 10.5858 / arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F.، Singal AG Surveillance for hepatocellular carcinoma: أفضل الممارسات الحالية والاتجاهات المستقبلية.أمراض الجهاز الهضمي.2019 ؛ 157 (1): 54-64.دوى: 10.1053 / j.gastro.2019.02.049
8. الرابطة الأوروبية للبحوث L ، والمنظمة الأوروبية R ، C Therapeutics.المبادئ التوجيهية السريرية EASL-EORTC: علاج سرطان الخلايا الكبدية.ي الهيبارين.2012 ؛ 56 (4): 908-943.دوى: 10.1016 / j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G. ، Ha SA ، Kim HK et al.التحليل المشترك لـ AFP و HCCR-1 كواسمات مصلية مفيدة في سرطان الخلايا الكبدية الصغيرة: دراسة أترابية محتملة.ديس مارك.2012 ؛ 32 (4): 265-271.دوى: 10.3233 / DMA-2011-0878
10. Chen S ، Chen H ، Gao S ، et al.التعبير التفاضلي عن البلازما microRNA-125b في أمراض الكبد المرتبطة بفيروس التهاب الكبد B والإمكانية التشخيصية لسرطان الخلايا الكبدية الناجم عن فيروس التهاب الكبد B.خزان أمراض الكبد.2017 ؛ 47 (4): 312-320.دوى: 10.1111 / hepr.12739
11. هالي بي آر ، فوستر إف ، كودو إم وآخرون.علم الأحياء وأهمية البروتين الجنيني ألفا في سرطان الخلايا الكبدية.كثافة العمليات الكبد.2019 ؛ 39 (12): 2214-2229.دوى: 10.1111 / ليف .14223
12. Omata M ، Cheng AL ، Kokudo N ، et al.المبادئ التوجيهية السريرية لعلاج سرطان الخلايا الكبدية في منطقة آسيا والمحيط الهادئ: تحديث عام 2017.المنظمة الدولية لأمراض الكبد.2017 ؛ 11 (4): 317-370.دوى: 10.1007 / s12072-017-9799-9
13. شو فاي ، تشانغ لي ، هي وي وآخرون.القيمة التشخيصية لمصل PIVKA-II وحده أو بالاشتراك مع AFP في المرضى الصينيين المصابين بسرطان الخلايا الكبدية.ديس مارك.2021 ؛ 2021: 8868370.دوى: 10.1155 / 2021/8868370
14. Durin L. ، Praradines A. ، Basset S. et al.سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة خزعة السوائل الخلطية غير البلازمية: أقرب إلى الورم!زنزانة.2020 ؛ 9 (11).دوى: 10.3390 / خلايا 9112486
15. Mader S ، Pantel K. خزعة سائلة: الوضع الحالي والآفاق المستقبلية.علاج Oncol Res.2017 ؛ 40 (7-8): 404-408.دوى: 10.1159 / 000478018
16. Palmirotta R ، Lovero D ، Cafforio P ، وآخرون.خزعة سائلة من السرطان: أداة تشخيصية متعددة الوسائط في علم الأورام السريري.أدف ميد أونكول.2018 ؛ 10: 1758835918794630.دوى: 10.1177 / 1758835918794630
17. Mandel P.، Metais P. الأحماض النووية في بلازما الإنسان.CR Seances Soc Biol Fil.1948 ؛ 142 (3-4): 241-243.
18. Mouliere F ، Chandrananda D ، Piskorz AM ، وآخرون.الكشف المتقدم عن تعميم الحمض النووي للورم عن طريق تحليل حجم الشظايا.العلم يترجم الطب.2018 ؛ 10:466.دوى: 10.1126 / scitranslmed.aat4921
19. أندرهيل إتش آر ، كيتسمان جو ، هيلويج سي وآخرون.تعميم طول جزء الحمض النووي للورم.جينات PLOS.2016 ؛ 12 (7): e1006162.دوى: 10.1371 / journal.pgen.1006162
20. Cheng F ، Su L ، Qian C. تعميم الحمض النووي للورم: علامة بيولوجية واعدة في خزعة السرطان القائمة على السائل.الهدف الورم.2016 ؛ 7 (30): 48832–48841.دوى: 10.18632 / oncotarget.9453
21. بيتجوفدا س ، سوزين م ، ليري آر جيه وآخرون.الكشف عن الجراثيم DNA للورم في المراحل المبكرة والمتأخرة من الأورام الخبيثة التي تصيب الإنسان.العلم يترجم الطب.2014 ؛ 6 (224): 224ra24.دوى: 10.1126 / scitranslmed.3007094
22. Mehes G. الخزعة السائلة للتحليل التنبئي الطفري للسرطان الصلب: منظور أخصائي علم الأمراض.ياء التكنولوجيا الحيوية.2019 ؛ 297: 66-70.دوى: 10.1016 / j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L و Tuveri S و Yatsenko T et al.الكشف المبكر عن الورم عن طريق فحص الحمض النووي في البلازما: دعاية أم أمل؟القانون الإكلينيكي البلجيكي.2020 ؛75 (1): 9-1 دوى: 10.1080 / 17843286.2019.1671653
24. نيشيدا ن. تأثير فيروس التهاب الكبد والشيخوخة على مثيلة الحمض النووي في تسرطن الكبد البشري.علم التشريح المرضي.2010 ؛ 25 (5): 647-654.دوى: 10.14670 / HH-25.647.003